病原微生物基因扩增检测

□ 三台县疾病预防控制中心 雷玉林

病原微生物基因扩增检测（PCR）是基因扩增技术的一次重大革新。可以将极微量的靶DNA特异性扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力，能检测单分子DNA或每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品，因而此方法在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域广泛应用和迅速发展。病原微生物基因扩增检测不仅能满足病毒性疾病诊断的需要，还有助于疾病预后的判断、疗效的监测等等。

病原微生物基因扩增检测的检测的原理是什么

首先，要对含有所需扩增分析的靶DNA双链进行处理，对其通过采用热变性处理的方式，将靶DNA双链转变为两条寡聚核苷酸单链，并且要根据一对已知的DNA序列进行人工合成，形成寡聚核苷酸片段，使其与靶DNA的两端邻近序列呈互补状态，并将该寡聚核苷酸片段作为引物。这个引物的范围主要就是所需要进行扩增的 DNA 片段，一般来说，需要有20～30个碱基对，如果碱基对过少，那么就难以保持与DNA单链之间的结合状态。如果引物与互补DNA进行了有效结合，就可以将靶 DNA 单链作为模板。当处于Taq DNA聚合酶的作用下时，可以将4种脱氧核苷酸作为主要的原料，并且要将引物向着一个方向进行延伸，最终就会形成一条新的DNA链，并且使DNA链重新进行复制，最终形成双链，在这之后就可以开始进行第二次的循环扩增。

病原微生物基因扩增检测的检测方法是什么

在以往的病原微生物基因扩增检测当中，标准的操作程序就是要将病原微生物基因扩增检测中必须要的反应成分加入到一个微量离心管当中，并将其放置在一定的额循环参数条件之下，从而开始进行循环扩增。

首先第一点要注意的是，将DNA模板、引物、DNTP、10 × PCR 缓冲液、ddH2O等按照顺序加入到微量离心管当中，将其混合均匀之后，离心15S，以确保最后产生的反应成分能够全部集中在微量离心管的底部。值得一提的是，上述的这些实验步骤仅仅只适合在实验研究当中使用，在现如今的商品化试剂中，已经将DNTP、10×PCR缓冲液以及引物、ddH2O混合在一起了，最终的反应体积大约为20~25μL，在实际的检测过程中，仅仅只需要检测人员将已经处理好的含有靶DNA的模板加入到其中就可以了。其次第二点需要特别注意的是，病原微生物基因扩增检测的循环程序需要检测人员根据实验室当中所使用的实际说明书进行分析，从而设定出合理的循环程序。

病原微生物基因扩增检测的临床意义是什么

由于病原微生物基因扩增检测具有较高的特异性以及敏感性，并且在使用过程中具有一定的快速性、敏感性、特异性、简便性等特点。因此，在实际的临床检测中获得了广泛应用。而在病毒性疾病的快速诊断过程中，病原微生物基因扩增检测不仅能够满足实际诊断需求，同时对于疾病的预后判断以及疾病的疗效监测等方面都有着十分良好的效果。

综合上文所述，病原微生物基因扩增检测技术以及相关技术在医学领域当中的发展速度是惊人的，上个世纪八九十年代，美国和英国分别在国际上召开了关于病原微生物基因扩增检测技术的专题研讨会。1988年，在美国召开的病原微生物基因扩增检测专题会议当中，主要针对病原微生物基因扩增检测自身的原理及应用进行了优化。而在1990年，在英国召开的专题会议则针对病原微生物基因扩增检测的最新进展成果进行了多方面研究。在病原微生物基因扩增检测不断发展的同时，其他相关的扩增技术也在不断诞生革新，而这些技术对于医学的发展有着不可忽视的影响。

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