中南医院检验科主任：检测阶段导致“假阴性”可能性小
针对病毒核酸检测中“假阴性”现象频发，国家卫健委日前发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）》表示，湖北省内疑似病例具有肺炎影像学特征者可作为临床诊断病例。
2月11日，澎湃新闻记者实地探访武汉大学中南医院临床基因扩增检验室，就核酸试剂盒研究工作如何进行、核酸检测“假阴性”和结果偏差等问题与该院检验科主任李一荣进行对话。
新型冠状病毒的检测包括“样本采集”“直接或灭活后提取核酸”“扩增检测核酸”三部分。
澎湃新闻在现场看到，进入临床基因扩增检验室之前，会经过一段缓冲区域，地上贴有两个方向的黄色地标，往左走是清洁区，往右走是污染区。
沿着指示地标往右走，第一扇门口放着一瓶“消毒液”。李一荣介绍，如果没有接触污染的体液或者血液样本，实验室工作人员进入或者离开实验室时，都要将手消毒，进行处理，防止把病源、病毒和细菌带去或带离实验室。
继续深入，来到微生物检验的实验室，实验室内摆放着血培养仪、质谱仪等检测设备。另一个实验工作区域，有穿戴防护装备的工作人员正在工作，旁边放了样本试剂。“这些仪器可以检验肝、肾、心功能的指标。由于新冠肺炎疫情，目前主要检测新冠病毒。”李一荣说。
在进行核酸检测的“临床基础实验室（1）”门前，左侧贴有“重症污染区，非操作人员禁止入内”的字样。李一荣介绍，实验室里面正在消毒，刚完成核酸提取工作，是重度污染区。“病毒存在传染性，当把样本核酸提取后，可能会有病毒的残留，需要消毒一小时左右。”李一荣说。
再走进核酸扩张区，李一荣介绍，这里有PCR（聚合酶链式反应）扩增仪，病毒和核酸分子通过扩增仪可以从1个变为2个，2个变成4个，4个变成8个，扩增一次核酸数量以2倍扩增。由于是人为扩增就可以加入标记物，把核酸做了标记，可以通过自动化的仪器看到扩增过程，并同时检测。
李一荣指着电脑屏幕上的核酸扩增曲线图说：“一条线表示一个样本，当扩增到一定程度时会呈指数级别的增加，围成一个陡坡时就可以判断是阴性还是阳性了。”
李一荣表示，很多因素都可能导致核酸检测出现“假阴性”，但总体来说，核酸检测还是非常有价值的。他认为核酸检测是明确新冠肺炎的重要依据。由检测人员人为导致“假阴性”的可能性非常小，核酸检测阴性不能排除新冠病毒肺炎，但是核酸阳性的检测结果是具有确诊价值的。
【对话】
澎湃新闻：请简述新型冠状病毒肺炎的核酸检测步骤。
李一荣：首先要把样本中新型冠状病毒的核酸提取出来，因为核酸是新冠病毒肺炎的重要组成部分；其次鉴别核酸是新冠病毒的核酸还是其它病毒核酸，通过PCR（聚合酶链式反应）的方法，把病毒核酸量扩增到一定程度，这样自动化的仪器就有可能识别；在扩增过程中要把病毒的核酸片段进行标记，让自动化的仪器能够看到。从理论上来讲，这种方法，只要有一个新冠病毒的核酸分子就能检测出来。
澎湃新闻：怎么看待有人认为核酸检测有50%的可能性是“假阴性”的观点？
李一荣：我个人不同意这种观点。根据我的检测经验，我们最高的检测阳性率是可以做到60%的。导致核酸检测出现“假阴性”的原因有很多，其中有三方面原因比较关键。第一个原因是样本采集问题，样本合格的标准是一定要采集到人体呼吸道的上皮细胞。第二个原因是病毒保存液。如果病毒可以保存下来，病毒里的核酸也能保存下来，如果病毒保存液不合格，失去功能，另外如果样本要经过很长时间才能到检验科，病毒核酸就可能被释放出来，一旦释放，核酸的长链会降解成很短的片段，就扩增不出来。第三个原因是跟试剂性能不足有关。此外，可能还跟患者本身有关，不少患者的感染部位在下肺，上呼吸道咽部病毒暂时没有，所以可能检测不到新冠病毒。但总体来说，核酸检测还是非常有价值的。我认为核酸检测是明确新冠肺炎的重要依据。由检测人员人为导致“假阴性”的可能性非常小，核酸检测阴性不能排除新冠病毒肺炎，但是核酸阳性的检测结果是具有确诊价值的。
澎湃新闻：怎么降低“假阴性”概率？
李一荣：第一，对采样人员进行培训，采到的样本不能是口水，不能是唾液，一定要含有咽部的上皮细胞。第二，使用规范的病毒保存液，如果仅使用生理盐水，这样容易导致病毒核酸降解，而且样本采集后不能放在常温时间过长，需要尽快送到检验科。第三，进一步对生产的核酸检测试剂盒评估，筛选出性能最佳的试剂供临床使用。如果以上三方面都做到了，应该可以降低核酸检测结果“假阴性”率。
澎湃新闻：如果每一个环节规范性操作，是不是一次核酸检测可当作检测结果？
李一荣：从理论上来讲是可以的。但是我们还是担心取样等因素，因为在出院过程中，很多患者还在用药，药物可能也有影响，国家制定两次核酸检测是为了避免漏掉没有完全清除病毒的病患。如果病毒没有完全清除，它也是具有传染性的。这个新冠病毒肺炎传染性特别强，从稳妥出发，两次检测是有必要的。
澎湃新闻：从疫情公开到现在，你们检验科工作人员的院感率是多少？
李一荣：到目前为止，我们检验科没有一名同事感染新冠病毒肺炎。我经常跟同事们强调一定做好防疫工作，要求同事戴好口罩，在实验室作业要戴手套，离开实验室要洗手。因为新冠病毒肺炎主要是两种传播方式，一是呼吸道传播，二是接触传播。那么戴好口罩可避免新冠病毒通过呼吸道进行传播，戴好手套可避免通过接触而感染新冠病毒。
澎湃新闻：检测的样本是来自哪些医院？
李一荣：主要来自武汉大学中南医院和武汉市第七医院，未来可能包括雷神山医院和武汉客厅方舱医院等。
澎湃新闻：一天需要检测多少份样本？
李一荣：2月10日，我们检测了520余份。最多一天，可以检测600份。
澎湃新闻：完成一次核酸检测周期是多长？
李一荣：我们用的是商品化试剂盒，不同的厂家推出的试剂盒是不一样的。核酸扩增及检测时间长短不一，短的80分钟，长的150分钟。另外完成100个样本的核酸提取，需要1-2小时，批量检测（96或100个样本）是3-4小时。
澎湃新闻：核酸提取区和核酸扩增区环境有哪些特殊要求？
李一荣：核酸检测必须拿到湖北省卫生厅颁发的许可证。实验室要求单向流动，试剂放在相对清洁的区域，房间换气设备正常，有生物安全柜，有移动紫外车，工作人员也必须通过相关培训。
澎湃新闻：确诊患者也需要做两次核酸检测吗？
李一荣：如果第一次核酸检测结果是阳性，结合临床表现就能明确病因。但核酸结果呈阴性的病患，当病人的症状、体征、接触史、流行病史支持新冠病毒肺炎的可能性，则还要继续做二次。因为核酸检测是明确新冠肺炎病原体的最重要的方法，对于感染者来说，反复采样是可以拿到阳性的结果。检验科的检验人员一定会对样本负责，做出什么结果就报告什么结果。
澎湃新闻：对于新冠肺炎，还有哪些尚未知道的？
李一荣：还有很多方面值得研究。一般认为新冠病毒肺炎传染源是蝙蝠，但是蝙蝠是不直接传给人，那么中间宿主是谁，这是不清楚的。其次，一旦感染新冠病毒肺炎，这个病毒是否会发生变异，我们也暂时不清楚。目前，国家科技部，国家自然科学基金委，湖北省等相关部门已经投入大量经费做新冠病毒肺炎的研究。我相信经过一段时间的研究，会有更多的谜团被解开。(本文来自澎湃新闻，更多原创资讯请下载“澎湃新闻”APP)
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