结核病分枝杆菌快速药敏实验
□ 内江市中医医院 廖清松
随着结核病的患病率不断增加，对全球已造成了极大的威胁。2017年全球约有 55.8 万 人 为 耐 利 福 平 结 核 病(RR-TB)，而这些人中有82%为多重耐药结核病(MDR-TB)。为减轻结核分枝杆菌对药物的耐药性和及时预防治疗的效果，世界卫生组织（WHO）总结，治疗结核病应采用不同的药物联合，并根据不同的结核菌耐药性进行药敏试验显示，一些药物联合使用能够增加药物的抗菌活性。WHO在2019—2023年总体工作规划提出关于结核病的目标：在2018年至2023年期间，结核病死亡人数至少减少50%；到2023年，耐药结核病患者的治疗覆盖率至少达到80%。所以找到新的抗结核菌治疗方式以应对耐药结核菌的传播和控制成为目前临床研究的重点。
临床出现大量耐多药结核分枝杆菌的病例，而且复治患者的治愈率只有初治患者的二分之一，这对WHO控制结核病方案的落实以及未来目标实现造成了极大困扰。能否控制住MDR-TB 最重要的就是在患者患病早期就诊断出耐药菌株，并能及时采取有效的治疗措施，而传统的结核杆菌药物敏感测试则需要4～8周之后才能出结果，不能及时指导临床用药。所以，能否研制出快速并且敏感的结核杆菌药物敏感实验是全球人民重点关注的事情。
下面文章将对表型药敏实验和分子药敏实验两个方向进行具体的阐述。
一、表型药敏实验
（一）氧化还原指示剂法在液体培养基中直接加入结核菌，并在其中添加多种浓度不同的抗结核药物和氧化还原指示剂，培养一段时间后观察指示剂的颜色变化，若出现氧化还原反应则证明对这种药物具有耐药性。常用指示剂一般为XTT和刃天青。氧化还原指示剂法不需要任何特殊器皿，该方法成本较低，并且十天左右就可以得到试验结果，敏感性非常高但特异性不是很强，常被杂菌污染，造成实验结果假阳性。
（二）噬菌体生物扩增法结核分枝杆噬菌体入侵结核分枝杆菌内迅速大量繁殖，导致菌体裂解死亡，结核分枝杆菌裂解死亡后就能在菌体周围发现大量透明的噬菌斑，表明有耐药菌株，在培养基中加入抗结核药物之后便不会出现该现象，该方法24小时之内就能得到检测结果。但可能会因每次实验所用结核杆菌噬菌体不同而导致临床试验结果不同。
（三）显微镜观察药物敏感度检测技术
一种对结核杆菌进行观察并能进行耐药程度检测的液态培养方式。培养基中的结核杆菌分泌出大量的索状因子，呈现出特征性的索状结构，可在倒置显微镜中被观察到，这种方式能够确定是否会生长出结核杆菌和是否对药物敏感。该方法对样品纯度要求高，用量大，步骤繁琐，成本高。
二、分子药敏实验
根据不断的研究发现编码结核菌RNA聚合酶β亚基的rpoB突变会使其活性发生变化，对表现为耐药的菌株进行分离提取，发现其中大部分的耐药菌株会发生rpoB的突变。目前在实验中经常使用的异烟肼和利福平，有大约90%的结核杆菌同时表现为耐药，因此检测是否发生rpoB的突变是一个筛查耐多药结核杆菌非常好的方法。另外，NDA测序，PCR-单链构象多态性分析，线性探针技术，DNA芯片等技术多存在价格高昂，操作复杂等问题，难以普及推广。
结核病对人类生命安全都造成了极大威胁，所以对结核分枝杆菌快速药敏实验的研究刻不容缓。有多个国家正全力以赴，现在已经应用的许多结核分枝杆菌快速药敏实验还存在很多问题，如测试时间过长或药物过于单一不能显示出多种药物联合的结果等，但这些问题都正在改善，更健全的结核分枝杆菌快速药敏实验正在不断地被研制出来。
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